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你知道熒光定量PCR的應(yīng)用嗎?

 更新時(shí)間:2023-09-12 點(diǎn)擊量:1120

熒光定量PCR(Real-time PCR),是指在PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),通過對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測,最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。那么你知道熒光定量PCR的應(yīng)用嗎?讓我們一起來看看吧!

一、分子生物學(xué)研究

1.核酸定量分析:

對(duì)傳染性疾病進(jìn)行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因拷貝數(shù)的檢測,RNAi 基因失活率的檢測等。

2.基因表達(dá)差異分析:

比較經(jīng)過不同處理樣本之間特定基因的表達(dá)差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學(xué)處理等 ) ,特定基因在不同時(shí)相的表達(dá)差異以及cDNA芯片或差顯結(jié)果的確證。

3.SNP 檢測:

檢測單核苷酸多態(tài)性對(duì)于研究個(gè)體對(duì)不同疾病的易感性或者個(gè)體對(duì)特定藥物的不同反應(yīng)有著重要的意義,因分子信標(biāo)結(jié)構(gòu)的巧妙性,一旦SNP 的序列信息是已知的,采用這種技術(shù)進(jìn)行高通量的 SNP 檢測將會(huì)變得簡單而準(zhǔn)確。

4.甲基化檢測:

甲基化同人類的許多疾病有關(guān),特別是癌癥, Laird 報(bào)道了一種稱作 Methylight的技術(shù),在擴(kuò)增之前先處理 DNA ,使得未甲基化的胞嘧啶變成尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶不受影響,用特異性的引物和 Taqman探針來區(qū)分甲基化和非甲基化的 DNA ,這種方法不僅方便而且靈敏度更高。

二、醫(yī)學(xué)研究

5.產(chǎn)前診斷:

人們對(duì)遺傳性物質(zhì)改變引起的遺傳性疾病還無法治療,到目前為止,還只能只能通過產(chǎn)前監(jiān)測,減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發(fā)生,如為減少 X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測其Y性別決定區(qū)基因是一種無創(chuàng)傷性的方法,易為孕婦所接受。

6.病原體檢測:

采用熒光定量PCR檢測技術(shù)可以對(duì)淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類乳頭瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、 結(jié)核分枝桿菌、EB病毒和巨細(xì)胞病毒等病原體進(jìn)行定量測定。與傳統(tǒng)的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優(yōu)點(diǎn)。

7.藥物療效考核:

對(duì)乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關(guān)系。HCV高水平表達(dá),干擾素治療作用不敏感,而HCV低滴度,干擾素作用敏感;在拉米夫定治療過程中,HBV- DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發(fā)生變異。

8.腫瘤基因檢測:

盡管腫瘤發(fā)病的機(jī)理尚未清楚,但相關(guān)基因發(fā)生突變是致癌性轉(zhuǎn)變的根本原因已被廣泛接受。癌基因的表達(dá)增加和突變,在許多腫瘤早期就可以出 現(xiàn)。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR不但能有效地檢測到基因的突變,而且可以準(zhǔn)確檢測癌基因的表達(dá)量。目前用此方法進(jìn)行過端粒酶hTERT基因、慢性粒細(xì)胞性白血病WT1基因、腫瘤 ER基因、前列腺癌PSM基因、腫瘤相關(guān)的病毒基因等多種基因的表達(dá)檢測。

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